Hvordan kan jeg isolere bakterier fra jord

? Jord er en rik kilde til mange forskjellige typer bakterier . Bakterier hjelpe i råtnende planter og dyr organisk materiale , i å fikse uorganiske elementer og i samspill med planterøtterog jordpartikler . Selv i en liten jordprøve , slik som det som finnes i en spiseskje , er det millioner av enkelte bakterier tilstede . Oppgaven med å isolere de enkelte bakterier , er å fortynne jordprøven for å få bakteriekonsentrasjonenlav nok til at en enkelt bakterie kan skilles fra andre og kan vokse inn i en ren koloni på næringsagar . Du trenger
Trypticase soya buljong
5 ml reagensrør , steriliserte og avkortet
Sterile tre Popsicle pinner
Wax merking blyant
Test tube stativ arkiv Tørkepapir
Bleach ( 10 prosent løsning )
bunsenbrenner
Kamper
Inoculation sløyfe
Trypticase soya agar
Petri plater arkiv Inkubator
Kjøleskap på
Vis flere instruksjoner
jordprøve
en Test rør brukes til å fortynne jordprøver .

Sett av en korket sterile reagensrør containg 5 ml av nærings trypticase soyabuljong. Velg en steril Popsicle pinne .
2 Bruk en steril Popsicle pinne for å samle jord .

Gå ut og samle en liten jordprøve med tuppen av Popsicle pinne , ved hjelp av steril teknikk , en metode for å sikre at prøven er ikke forurenset , og brukeren ikke er infisert .
3

korken testrøret og legger jord på næringsbuljong i reagensglasset . Bland jorda inn i buljong med Popsicle pinne . Dekk reagensrør med hetten . Skriv oppsamlings dato og samling plassering på siden av testrøret ved hjelp av voks merking blyant.
4

sette testrøret i et reagensrør stativ i omtrent 30 minutter for å tillate at jord for å gjøre opp til bunnen .
Inokuler Petri Dish
5

Desinfiser arbeidsflaten ved å rense den med 10 prosent blekemiddel og tørkepapir.
6

Slå petriskålen slik at bunnen lokket som inneholder agar er opp . Tegn en T på den nederste lokket , med tverrliggeren av T skille av den øvre tredjedel av lokket og stammen av T dividere de nedre to tredjedeler i to.
7 Bruk en gassbrenner til å flamme inoculating sløyfer .

Slå på og tenne gassbrenneren . Flame vaksinasjonen sløyfe over bunsenbrenner flamme .
8

korken reagensglasset og røre sløyfen i de øvre lag av klarere væske . Trekk ut løkken og re - dekke reagensrør .
T - Streak Metode
9 Lag en sikksakk strek over en tredjedel av parabolen .

Bruk tverrstangen av T du tegnet på baksiden av den nederste lokk som et referansepunkt . Berør inokulere øye i den ene siden av rommet over T tverrstangen og trekker spissen over overflaten av agar i en sikk-sakk- linje , å avslutte linjen ved den motsatte side av rommet.
10

Fjern inoculating sløyfe og lukke petriskål . Flamme loopen i bunsenbrenner , og la den avkjøles raskt . Åpne petriskål og røre loopen til ett sted nær slutten av linjen allerede trukket av loopen . Foreta en sikk-sakk- linje i rett vinkel til den første linje, dekker det første rom under T tverrstangen og til den ene side av stammen.
11

fjerne sløyfen og lukke petriskål . Flamme sløyfen igjen , åpner du petriskål , og røre litt avkjølt loop til den andre linjen nær sin ende . Tegn en sikksakk linje i rett vinkel til den andre linjen i de resterende åpen plass på petriskål .
12

Lukk petriskål etter uttak av loopen. Flamme løkken og sett den til side . Slå av bunsenbrenner .
Sekundær Kultur
13 Velg en enkelt koloni å isolere bakterier videre .

Sett petriskål i en inkubator ved 30 grader Celsius i 48 timer. Ta den ut og undersøke agar for vekst av bakteriekolonier. Velg en koloni som ser jevn og diskret i generelle utseende , en indikasjon på at kolonien oppsto fra bare en enkelt bakterie . Circle plasseringen av kolonien på baksiden av den nederste lokk med merket blyant.
14

Flame den inokulere sløyfen. Åpne petriskål og røre litt avkjølt sløyfe til sentrum av kolonien .
15

Gjenta fremgangsmåten for å lage en T - strek på en ny petriskål med agar i bunnlokket. Når strek er laget og petriskålen er lukket, skrive inn dato og jordprøven podestoff ble tatt fra på undersiden av bunnlokket . Slå av bunsenbrenner .
16

Inkuber petriskål på 30 grader Celsius i 48 timer . Undersøke koloniene som har vokst på agar , på jakt etter ensartethet av farge, form og tekstur . Gjenta den sekundære kultur prosedyren hvis det er noen kolonier som avviker markert i utseende fra de andre , noe som indikerer at en enkelt bakterie ikke ble isolert .
17 identiske utseende kolonier indikerer bakteriell isolasjon .

Kjøle agar plate som inneholder identiske -vises kolonier på det , med ensartethet å være en god indikasjon på at bare en enkelt bakterie har blitt isolert fra jordprøven .
18

Utføre andre tester for identifikasjon av den isolerte bakterien hvis ønskelig , for eksempel gram flekker , mikroskopisk undersøkelse og kultur på ulike typer agar .